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石蠟切片厚度一般為多少 石蠟切片制作過程是什么

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摘要:石蠟切片(paraffin section)組織學常規制片技術中最為廣泛應用的方法。石蠟切片不僅用于觀察正常細胞組織的形態結構,也是病理學和法醫學等學科用以研究、觀察及判斷細胞組織的形態變化的主要方法,而且也已相當廣泛地用于其他許多學科領域的研究中。那么下面我們就一起看看,石蠟切片厚度一般為多少以及石蠟切片制作過程是什么吧。

一、石蠟切片厚度一般為多少

石蠟切片厚度通常為4~7微米,切出一片接一片的蠟帶,用毛筆輕托輕放在紙上。這個厚度通常可以滿足大部分實驗室的需求。如果需要更薄的切片厚度,則可以使用微切機進行切割,厚度可達1-2微米,但這種切片會更脆弱,操作難度更大。

二、石蠟切片制作過程是什么

石蠟切片的制作步驟如下:

1、組織包埋

(1)乙醇脫水:組織經不同濃度的乙醇溶液進行逐級脫水70%、80%、90%、95%、100%、100%,各級乙醇 40min(注意:骨性及鈣化組織需在JYBL-Ⅱ脫鈣液中浸泡24h,待組織軟化后再進行乙醇脫水步驟)。

(2)透明:組織依次浸泡于三個二甲苯中,每缸各1h。

3)浸蠟:組織依次浸泡于三個石蠟缸中,每缸各1h。

(4)包埋:將液態的石蠟倒入模具盒中,再將浸好蠟的組織塊平放底部,注意切面方向朝下放置,待石蠟凝固后去掉包埋框,完全冷卻變硬后再修整蠟塊,組織外圍的石蠟保留適中以便切片。

2、切片與貼片

切片制作將預冷的蠟塊固定在石蠟切片機上,使石蠟塊的切面與刀口成平行方向,刀的傾斜度通常15℃,轉動輪轉推進器,調節切片厚度為4μm,切成厚度均勻的切片。

左手持毛筆,右手旋動切片機轉把,切片帶出來之后,用毛筆輕輕托起,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,其水溫45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,右手用鑷子輔助推動,附貼至玻片上的三分之二處。切片貼附后,放在空氣中稍晾干,放置65℃烤片機上烤1h,再放置烘箱內烘烤2h。

3、石蠟切片脫蠟至水

依次將石蠟切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脫蠟。

4、HE染色

石蠟切片入蘇木素染0.5-1分鐘min,自來水漂洗,1%鹽酸酒精分化數秒,自來水漂洗,然后1%氨水水溶液返藍1min,流水沖洗數秒,放入伊紅染液中染色數秒,流水漂洗。

5、脫水封片

石蠟切片依次放入75%乙醇2min-85%乙醇2min-無水乙醇5min-無水乙醇5min-二甲苯5min透明,將切片從二甲苯拿出來中性樹膠封片。

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