色譜柱的工作原理
1.分配原理：在分配色譜中，固定相是一種液體，均勻地涂漬在載體表面。當(dāng)樣品隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱后，各組分在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配。分配系數(shù)大的組分在固定相中溶解度大，在固定相中停留時(shí)間長，移動(dòng)速度慢；而分配系數(shù)小的組分在流動(dòng)相中溶解度大，在柱內(nèi)移動(dòng)速度快。經(jīng)過多次分配后，不同組分在色譜柱中逐漸分離。例如，在分析含有多種有機(jī)化合物的樣品時(shí)，極性較大的化合物在極性固定相中的分配系數(shù)較大，會(huì)在柱中后流出；非極性化合物則在非極性流動(dòng)相中分配系數(shù)較大，先流出色譜柱。
2.吸附原理：吸附色譜的固定相是固體吸附劑，其表面存在著吸附中心。樣品進(jìn)入色譜柱后，各組分分子會(huì)被吸附到固定相表面。吸附能力強(qiáng)的組分與固定相表面的吸附中心結(jié)合緊密，在柱內(nèi)移動(dòng)速度慢；吸附能力弱的組分則容易被流動(dòng)相洗脫，移動(dòng)速度快。隨著流動(dòng)相的不斷沖洗，不同組分因吸附-解吸能力的差異而實(shí)現(xiàn)分離。例如，在分離不同類型的芳烴時(shí)，含有較多取代基的芳烴由于與吸附劑表面的作用力較強(qiáng)，會(huì)在色譜柱中后流出。
3.離子交換原理：離子交換色譜的固定相是離子交換樹脂，上面帶有可交換的離子基團(tuán)。當(dāng)樣品進(jìn)入色譜柱后，溶液中的離子與固定相上的離子進(jìn)行交換。離子交換能力強(qiáng)的組分與固定相上的離子結(jié)合緊密，在柱內(nèi)移動(dòng)速度慢；離子交換能力弱的組分則容易被流動(dòng)相中的離子置換，移動(dòng)速度快。通過這種方式，不同離子組分在色譜柱中得到分離。例如，在分析混合氨基酸時(shí)，不同氨基酸由于所帶電荷和極性不同，與離子交換樹脂的交換能力不同，從而在柱中實(shí)現(xiàn)分離。
4.尺寸排阻原理：尺寸排阻色譜的固定相是具有一定孔徑分布的多孔性填料。樣品進(jìn)入色譜柱后，分子尺寸較大的組分無法進(jìn)入填料的小孔，只能在填料顆粒之間的空隙中流動(dòng)，路徑短，先流出色譜柱；而分子尺寸較小的組分能夠進(jìn)入填料的小孔，在柱內(nèi)停留時(shí)間長，后流出色譜柱。基于分子尺寸的不同，混合物中的各組分在色譜柱中得到分離。例如，在分離不同分子量的聚合物時(shí)，高分子量的聚合物先流出，低分子量的聚合物后流出。
