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常用的細胞培養基有哪些 細胞培養基的品質要求

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摘要:培養基除了培養微生物外,細胞也是可以用培養基培養的,常用的細胞培養基主要有MEM培養基、DMEM培養基、IMDM培養基、Ham 's F-12K培養基、DMEM/F12培養基、McCoy’s 5A培養基、RPMI-1640培養基、L15培養基等多種,不管是哪種細胞培養基,一般在品質方面需要滿足外觀、溶解性、pH值、水分、冰點滲透壓等方面的要求。下面一起來了解一下常用的細胞培養基有哪些以及細胞培養基的品質要求吧。

一、什么是細胞培養基

細胞培養基是培養細胞的培養基,既是供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養細胞生長和繁殖的生存環境,一般是鹽、碳水化合物、維生素、氨基酸、代謝前體、生長因子、激素和微量元素的復雜混合物。

二、常用的細胞培養基有哪些

細胞培養基的種類眾多,由于不同細胞系對這些成分的要求各不相同,因此產生了不同類型的培養基,常用的細胞培養基主要有:

1、MEM培養基

是一種添加了營養物的最低必需培養基,僅含有12種必需氨基酸、L-谷氨酰胺和8種維生素,含糖量為1g/L。MEM是一種最基礎、最常用的細胞培養基,主要應用于貼壁細胞的培養,在添加血清后,可用于培養多種單層生長的細胞,如成纖維細胞。修改配方后的a-MEM則可廣泛應用于各種哺乳動物懸浮和貼壁細胞培養。

2、DMEM培養基

氨基酸含量是MEM的兩倍,維生素含量是MEM的4倍,以及硝酸鐵、丙酮酸鈉和一些補充氨基酸。此外,DMEM分為低糖型和高糖型,葡萄糖含量分別為1g/L和4.5g/L。(低糖適于依賴性貼壁細胞培養,特別適用于生長速度快、附著性較差的腫瘤細胞培養;高糖更適合高密度懸浮細胞培養,也適用于附著性較差,但又不希望它脫離原來生長點的克隆培養,也可用于雜交瘤中骨髓瘤細胞和DNA轉染的轉化細胞的培養。)

3、IMDM培養基

用于淋巴細胞和雜交瘤細胞的生長。與DMEM相比,添加了HEPES和硒,硝酸鉀取代了硝酸鐵,并且含有更多的氨基酸、維生素和無機鹽。

4、Ham 's F-12K培養基

用于支持原代細胞的生長和分化。F-12K增加了氨基酸、丙酮酸、生物素、鈣、鎂、腐胺和酚紅的含量。

5、DMEM/F12培養基

DMEM和F12的1:1混合物,能夠在低血清條件下支持多種哺乳動物細胞的培養,在此培養基中成功培養的細胞包括:MDCK、神經膠質細胞、成纖維細胞和人內皮細胞等。

6、McCoy’s 5A培養基

廣泛用于多種原代細胞及細胞系的培養,如來源于骨髓、皮膚、脾臟、腎臟和肺等組織的哺乳動物原代細胞。

7、RPMI-1640培養基

是在McCoy’5A的基礎上進行改良研發出的,最初用于人白血病細胞的懸浮培養,后來發現也適用于HeLa、MCF-7、PC12、外周血單核細胞(B/T淋巴細胞)和星形細胞的培養。RPMI 1640與其它培養基的區別是含有還原型谷胱甘肽和高濃度維生素。此外還含有含有MEM、DMEM中不含的生物素、維生素B12和對氨基苯。

8、L15培養基

L-15培養基的配方中不含用于CO2平衡環境的碳酸鹽緩沖系統, 而是用磷酸鹽、L-精氨酸、L-組氨酸和 L-半胱氨酸作為緩沖劑。用半乳糖和丙酮酸鈉代替葡萄糖以防止乳酸的形成。可以在無CO2培養箱中進行細胞培養,或者擰緊瓶蓋培養。

三、細胞培養基的品質要求

細胞培養基有多種,不同種類的細胞培養基用于培養不同細胞,一般來說,好的細胞培養基,需要滿足以下幾點要求:

1、外觀

顏色、粉末細度須均勻。

2、溶解性

培養基完全溶解,可以避免培養基內營養成分的流失。

3、pH值

哺乳類動物細胞生長需要合適的酸堿度,同時pH值的測定也可以檢查培養基的批間差異。

4、水分

培養基的營養成份很豐富,利于微生物的滋長,因此水分的含量控制可以延長有效期。

5、冰點滲透壓

細胞必須生活在合適的滲透壓環境中,同時滲透壓值的測定也可以檢查培養基的批間差異。

6、菌落總數

粉末培養基不是無菌制劑,培養基本身的營養成分很豐富,容易滋生微生物,因此菌落的控制可以延長有效期

7、細胞生長試驗

可檢查細胞培養基是否有促生長的能力,以及是否有不利細胞生長的毒素。

8、細菌內毒素

為滿足生物制品細菌內毒素的控制要求,作為生物制品生產原料的培養基同樣需要細菌內毒素控制。

9、穩定性

確定產品的儲存、運輸條件,產品的保質期限。

10、一致性

驗證產品的均一性。

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