一、培養基配好后為什么必須立即滅菌

培養基配好后，必須要馬上進行滅菌處理，這是為什么呢？

之所以培養基配好就要滅菌，是因為未滅菌的剛剛配置好的培養基是暴露在環境中的，可能染上環境中的大量細菌，而培養基也是這些細菌生長所需要的良好條件；如果不及時滅菌，會導致在環境中染上的細菌大量繁殖，消耗培養基中的營養成分，甚至產生有害物質，造成培養基滅菌后也不能使用。

二、如何檢查滅菌后的培養基是否為無菌

滅菌后，如果要求比較嚴格，必須是無菌培養基的話，可以進行無菌試驗，具體的方法是：

將已經滅完菌的菌棒放到25－28℃的恒溫環境中避光培養3天后，拿出來檢查看袋內有沒有雜菌滋生的痕跡，看菌袋內有沒沒有導演變色、出現斑點等情況的發生，如果有就證明滅菌不徹底。

三、影響培養基滅菌效果的因素有哪些

培養基滅菌要求要徹底，不徹底的話可能影響微生物的培養，一般影響培養基滅菌效果的因素主要有：

1、營養成分的保持

濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養基的營養成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當數量被破壞。在熱的作用下某些營養成分還可能因受熱而相互之間發生反應，造成培養基中原有營養成分的數量變化，因而影響培養基質量。

2、微生物的耐熱性

細菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細菌芽孢減少到所規定數目的時間。

3、pH值

pH值對微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時，微生物最不易死亡。pH<6.0時，微生物比較容易死亡，此時H 很容易滲入微生物的細胞，從而改變細胞的生理反應，促使其死亡。所以培養基的pH越低，所需的時間也越短。

4、培養基成分

油脂、糖類及蛋白質等組成的高濃度有機物會包于細胞的周圍形式一層薄膜、影響熱的傳導。而高濃度的鹽類、色素則削弱其耐熱性，滅菌較易。例如：大腸桿菌在水中加熱至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加熱4-6分鐘才死亡，在30%糖液中需30分鐘才死亡。一般糖類含量較多的時候最好選用115℃，30分鐘；一般的培養基可選擇121℃20分鐘。

5、泡沫

泡沫中的空氣形成隔熱層，使熱量難以滲透進去，殺死其中的雜菌。

6、顆粒

顆粒小，容易滅菌，顆粒大，則難滅菌。對于含有少量較大顆粒及粗纖維的培養基，可用粗濾的方法（不應影響培養基質量）予以除去，培養基結塊會造成培養基滅菌的不徹底。

8、滅菌鍋內空氣是否排凈

這個是影響滅菌是溫度和壓力比例關系的要點，同樣達到了相同的壓力的情況下，如果空氣未能排凈，也就是說不是純蒸汽滅菌，此時的溫度不一定能達到目的要求，會嚴重影響滅菌效果。